紫外檢測儀使用方法

   復(fù)方頭孢氨芐膠囊由頭孢氨芐和甲氧芐啶兩種成分制成，由于二者合用可雙重阻斷**在生長繁殖過程中細胞壁及菌體內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)合成，從而顯示較好的**作用，其**作用相當(dāng)于倍量頭孢氨芐。頭孢氨芐（Cefalexin），***\β-內(nèi)酰胺類\頭孢菌素類。它能抑制細胞壁的合成，使細胞內(nèi)容物膨脹至破裂溶解，殺死**。

本文用高效液相色譜法（HPLC法）測定復(fù)方頭孢氨芐片中頭孢氨芐的含量。

1 儀器與試劑

儀器：DIONEX P680AISO型高效液相色譜儀、UVD17OU型HPLC檢測器、梅特勒電子分析天平

試劑：甲醇（色譜純、分析純）、純凈水

標(biāo)準(zhǔn)對照樣品：頭孢氨芐對照品（中國藥品生物制品檢定所）

試驗樣品：頭孢氨芐膠囊

2 試驗過程

2.1  色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實驗

    用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（色譜柱 Dikma Technologies Diamonsil^TM C₁₈, 5m, 250×4.6mm）；水-甲醇-3.85%醋酸鈉溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）為流動相；檢測波長為254nm；理論塔板數(shù)按頭孢氨芐峰計算不低于1500；流速：1 ml.min^-1。

2.2  對照品儲備液的制備

     準(zhǔn)確稱取頭孢氨芐對照液10 mg，置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.3  試驗樣品溶液的制備

     取10個膠囊，準(zhǔn)確稱取質(zhì)量，研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于頭孢氨芐0.1 g），置100 ml容量瓶中，加流動相適量，充分振搖使溶解，再加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 ml置10 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4  陰性空白溶液的制備

     按頭孢氨芐膠囊的制備工藝制備缺主藥的模擬膠囊，按照“供試品溶液的制備”項下所制備得出的溶液作為陰性空白溶液。

2.5  專屬性試驗

     在上述色譜條件下，分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性空白溶液各10 μl進樣，記錄色譜圖，觀察樣品峰的保留時間是否有雜峰。

3  試驗結(jié)果

3.1  儀器精密度試驗

     精密量取對照品儲備液1.0 ml 置10 ml量瓶中，加流動相至刻度（即線性關(guān)系考察中的第三個對照品溶液），重復(fù)進樣5次，每次10 μl，在上述色譜條件下進行分析，計算峰面積的RSD，要求RSD不大于2%。

本實驗采用對照品溶液(線性關(guān)系中第三個溶液)重復(fù)進樣5次，進行儀器精密度的考察。實驗結(jié)果顯示，RSD值為1.13%，符合RSD小于2%的要求。證明儀器精密度良好。

3.2  方法重復(fù)性實驗

     取主藥粉末5份精密稱定，按照“供試品溶液的制備”項，平行制備樣品溶液5份，按樣品測定方法測定，算出頭孢氮芐峰面積的RSD。

本實驗共制備5份供試品溶液，各吸取10μL連續(xù)進樣進行重復(fù)性試驗。實驗結(jié)果表明RSD值為8.44%，不符合RSD小于2%的要求，重復(fù)性實驗較差。 說明在制備溶液過程中存在較大的操作偏差，而且在測定供試品色譜圖時也存在操作不熟練或者不規(guī)范的現(xiàn)象以及進樣誤差等問題。在以后的試驗中應(yīng)該加以改正。

 3.3  線性關(guān)系考察

     依次精密量取對照品儲備液0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml 、2.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，各進樣10 μl，記錄色譜圖。以進樣濃度（μg /ml）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以峰面積A對濃度C回歸，得回歸方程。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖：

結(jié)果表明，頭孢氨芐濃度在20-200 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r=0.9993。

3.4  加樣回收率試驗

     采用加樣回收法，精密稱取 9 份已知含量的同批號頭孢氨芐膠囊樣品（約相當(dāng)于頭孢氨芐0.05 g）置于10 ml容量瓶中，精密稱定，再分別精密稱取頭孢氨芐對照品0.625 g，置 25 ml 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1 ml，2 ml，3 ml，各三份，加到上述供試品中，按“供試品溶液的制備”項操作制備溶液，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，按以下公式計算回收率：

回收率%=（測定平均值-本底量）/加入量×100%

其中本底量為加入流動相的量，加入量為加入對照品和供試品的量。

3.5  穩(wěn)定性試驗

    取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h進樣，各進樣10 μl，記錄色譜圖，峰面積若小于±1.0％，則樣品溶液穩(wěn)定性較好。

3.6  方法耐用性考察

    分別使用不同流動相組成、不同流動相pH值、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、不同柱溫和不同流速等，對同一批樣品進行測定，觀察其結(jié)果是否一致。

3.7 樣品含量測定

    分別取對照品溶液和供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積外標(biāo)法計算含量。

本實驗是利用外標(biāo)法中標(biāo)準(zhǔn)曲線法對頭孢氨芐膠囊中頭孢氨芐的含量進行測定。此法優(yōu)點在于不需要知道校正因子，只要被測組分全部出峰、無干擾、保留時間適 宜，就可以進行定量分析。而且操作簡單、快捷，應(yīng)用非常廣泛。本次實驗結(jié)果不是十分理想，說明在制備溶液過程中存在較大的操作偏差，而且在測定供試品色譜 圖時也存在操作不熟練或者不規(guī)范的現(xiàn)象以及進樣誤差等問題。在以后的試驗中應(yīng)該加以改正。